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30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺(Acr-Bis)溶液为无色无味液体，按丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺29:1配制，含有30%固体成份。常用于配制聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)，包括SDS-PAGE胶等，可以用于蛋白或核酸的分离与鉴定，是实验室的常用储备液。适用于一般生物学及医学研究。

• 30% Acr-Bis (29:1)有一定毒性，使用时请注意适当防护；
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶
  

  成分	5%浓缩胶	8%分离胶	10%分离胶	12%分离胶	15%分离胶
  	2mL	5mL
  H2O	1.4mL	2.25mL	1.95mL	1.65mL	1.15mL
  30% Acr-Bis (29:1)	0.33mL	1.4mL	1.7mL	2mL	2.5mL
  1M Tris pH6.8	0.25mL	-
  1.5M Tris pH8.8	-	1.25mL
  10% SDS	20μL	50μL
  TEMED	2μL	5μL	5μL	5μL	4μL
  10% APS	20μL	50μL	50μL	50μL	40μL

  • 凝胶的聚合时间与环境温度有关。温度较高时，聚合较快；气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
• 非变性DNA聚丙烯酰胺凝胶
  

  最佳DNA分离范围	凝胶浓度	各组分体积(mL)					总体积
  		去离子水	30% Acr-Bis (29:1)	5×TBE	10% APS	TEMED
  80～500bp	5%	63.3	16.7	20	0.8~1	0.1	100mL
  70～450bp	6%	60	20		0.8~1
  60～460bp	8%	53.3	26.7		0.8~1
  50～300bp	10%	46.7	33.3		0.5~0.8
  40～200bp	12%	40	40		0.5~0.8
  25～150bp	15%	30	50		0.5
  5～100bp	20%	13.3	66.7		0.5

  • 有大量文献报道PAGE胶中加入5%～10%的甘油能提高某些位点的分辨率。如果选择加入10%的甘油，则减少去离子水的用量10mL，同时加入10mL甘油。
    
  • 凝胶的聚合时间与环境温度有关。温度较高时，聚合较快；气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

• 灌制分离胶
  
  • 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具；
    
    • 加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
  • 将不同体积的30% Acr-Bis (29:1)、1M Tris、10% SDS和纯水在小烧杯或试管中混合；
    
  • 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡；
    
  • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可)，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1cm的水层，使凝胶表面保持平整；
    
  • 静置30～60min，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
• 灌制浓缩胶
  
  • 去除覆盖在分离胶上的水层；
    
  • 将不同体积的30% Acr-Bis (29:1)、浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合；
    
  • 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡；
    
  • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；
    
  • 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡；
    
  • 静置10～20min，等待浓缩胶聚合；
    
  • 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔；
    
  • 进行常规电泳操作。